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Comment C. Elegans est utilisé pour réduire au silence les gènes

Comment C. Elegans est utilisé pour réduire au silence les gènes


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L'expérience qui utilise C. Elegans pour faire taire les gènes. J'ai une question sur pourquoi et comment C. Elegans peut utiliser le plasmide d'ADN qui est généré avec le gène d'intérêt dans la bactérie en étant nourri avec la bactérie ?


D'après la façon dont vous avez décrit votre expérience, nourrir des bactéries C.elegans qui expriment un plasmide qui induira le silençage génique, alors @Kendall et moi pensons que vous effectuez probablement une expérience ARNi (interférence).

Comme l'écrit @Kendall :

Si c'est ce à quoi je pense, vous avez probablement des vers GFP+ qui finissent par être nourris

DH5-α E. coli qui ont été transformés à l'aide de CaCl2. Le résultat est que vos vers de contrôle devraient bien devenir fluorescents, et les vers expérimentaux auront une couleur sensiblement plus faible. Le processus ARNi est bien expliqué dans ce lien fourni par AMR. - Kendall

Les bactéries transcriront les molécules d'ARN codées par le plasmide d'ADN. Ces ARN auront des séquences complémentaires aux séquences de votre gène d'intérêt.

Lorsque le nématode mange les bactéries, les molécules d'ARN que la bactérie a produites seront absorbées par les cellules du ver.

L'enzyme Dicer clive ensuite l'ARNdb en petits fragments. Ces fragments sont alors capables de s'hybrider avec les ARNm transcrits à partir du gène d'intérêt. Cela entraînera soit une mauvaise liaison des ribosomes, soit un démarrage de la traduction hors cadre ou sans acides aminés clés, soit une fin prématurée de la traduction.

L'effet net est que les cellules ne produiront pas la protéine codée par le gène d'intérêt ou produiront une protéine non fonctionnelle. Si, comme l'a dit @Kendall, le gène d'intérêt est un gène rapporteur tel que la GFP, alors le résultat de l'expérience d'interférence sera C.elegans qui n'est pas fluorescent. Si le gène d'intérêt est une protéine structurelle telle que l'actine, alors vous verrez les effets de l'inactivation du gène de l'actine sur les cellules du ver.

Ce protocole vidéo en ligne de JoVE.com donne un aperçu détaillé des ARNi dans C.elegans expérimenter et montre également comment le protocole est mis en œuvre.


Voir la vidéo: P. pacificus eats C. elegans! (Juillet 2022).


Commentaires:

  1. Voodoomi

    je ne comprends pas quelque chose

  2. Rakkas

    Il y a aussi d'autres défauts



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